表1试验动物分组及处理

组别	羽数/组	接种方法	接种 菌量	药物	剂量	给药 方法
1组（连葛高剂量组）	50	胸肌注射	0.5mL	连葛口服液	1.5mL/kg	混饮
2组（连葛中剂量组）	50	胸肌注射	0.5mL	连葛口服液	1.0mL/kg	混饮
3组（连葛低剂量组）	50	胸肌注射	0.5mL	连葛口服液	0.5mL/kg	混饮
4组（氟苯尼考组）	50	胸肌注射	0.5mL	氟苯尼考可溶性粉	20mg/kg	混饮
5组（阳性对照组）	50	胸肌注射	0.5mL	－	－	－
6组（阴性对照组）	50	－	－	－	－	－

  试验期间每天定时观察并记录试验鸡的临床症状变化、死亡、增重情况，对死鸡作病理剖检和细菌分离、生化鉴定、O抗原测定。计算各组的保护率、治愈率、死亡率，于接种细菌前和试验结束时分别称量各组鸡的体重，计算相对增重率，并对各组间的上述指标进行统计学分析。 疗效评价指标 死亡率：凡在试验期间，出现鸡大肠杆菌病的典型湿热泄泻证（精神萎靡不振，羽毛蓬乱，离群呆立，食欲废绝，粪便呈黄绿色水便，少数粪便带血）并死亡；尸体剖检心脏、肝脏等有典型病变特征；并从肝脏、脾脏及肠系膜淋巴结中分离出大肠杆菌，判为死亡，试验结束时每组死亡鸡只数占该组试验鸡数的百分率为死亡率； 保护率：经用药后，湿热泄泻症侯有所缓解或痊愈均为保护，试验结束时每组存活鸡只数占该组试验鸡数的百分率为保护率； 治愈率：在试验期间，鸡经混饮给药后，精神状态、食欲、饮水恢复正常，体重增加，不再出现腹泻等临床症状，剖检无任何病变属治愈。试验结束时每组治愈鸡只数占该组试验鸡数的百分率为治愈率； 相对增重率：试验期间各试验组增重占阴性对照组增重的百分比。阴性对照组增重设为100%。 数据的分析和处理 对试验数据进行显著性检验，其中死亡率、保护率及治愈率用x2检验；增重采用t检验。 （二）结果 1、攻毒预试验 人工感染大肠杆菌约8小时后，各试验组鸡均出现不同程度的鸡大肠杆菌病典型症状：精神不振、腹泻、眼结膜潮红、食欲减退至废绝等。12小时后开始出现死亡，从病死鸡肝脏可分离到细菌，经生化鉴定为大肠杆菌。攻毒鸡的死亡情况见表2。

表2不同剂量、不同稀释度攻毒死亡鸡只数

死亡数 剂量	原液	10-1	10-2	10-3	10-4	10-5
1mL	5	5	5	5	4	2
0.5mL	5	5	5	4	3	2
0.25mL	5	5	4	3	2	1

为了更好的评价药物对鸡大肠杆菌病的预防效果，故在建立动物疾病模型时应选择适当的攻毒液浓度和用量，尽量达到动物发病但不死亡的理想效果。本试验选择半数致死量作为攻毒的最佳剂量。根据试验结果，选用攻毒浓度为细菌培养液10-4稀释液，剂量为0.5mL/只。 2、治疗试验 临床症状及死亡情况 除阴性对照组外其他各组雏鸡在攻毒约8小时后陆续发病，出现不同程度的鸡大肠杆菌病的典型症状（湿热泄泻证的证侯），主要表现为精神不振、羽毛松乱、两翼下垂、头颈缩入、闭眼昏睡、不愿走动、离群呆立、不同程度的腹泻、眼结膜潮红、食欲减退，严重者食欲废绝、卧地不起等。 阳性对照组在攻毒12小时开始出现死亡，24～48小时达到高峰，以后数日中，仍有鸡陆续死亡，全组大部分动物在整个试验过程中精神不振，食欲减少，拉白色稀粪。连葛口服液低剂量治疗组的动物在24～48小时间死亡较多，但随后的观察中没有再出现死亡，鸡只精神较好，采食饮水略差，多数在第7日后基本正常。中剂量、高剂量和氟苯尼考治疗组的动物在攻毒后也出现死亡，但死亡动物较少，且72小时后开始恢复，至试验结束多数鸡只精神、饮食恢复正常。试验各组在攻毒后144小时均没有再出现死亡现象。阴性对照组在整个试验过程中精神状态、食欲饮水正常，没有出现动物死亡现象。死亡情况见表3.

表3各组鸡不同时间死亡数量（只）

组别	0-12	12-24	24-36	36-48	48-60	60-72	72-96	96-120	120-144	144-168
1组（高剂量组）	0	1	2	2	2	1	0	0	0	0
2组（中剂量组）	0	1	2	3	2	0	1	0	0	0
3组（低剂量组）	1	2	3	5	2	1	1	0	0	0
4组（氟苯尼考组）	1	1	3	3	1	1	0	0	0	0
5组（阳性对照组）	2	4	6	7	3	2	1	0	1	0
6组（阴性对照组）	0	0	0	0	0	0	0	0	0	0

剖检病变 剖检病死鸡出现鸡大肠杆菌病的典型病变：气管黏液增多，肝脏大多有散在的出血点，病程稍长的表现出典型纤维素性心包炎、肝周炎变化，同时伴有肠黏膜肥厚，肠腔有多量黄色泡沫，肾脏稍肿。 分离菌株鉴定 从病死鸡肝脏可分离到细菌，经革兰氏染色镜检可见红色阴性小杆菌，多数单个散在，个别成双排列，两端钝圆，边缘整齐，表面光滑湿润，符合大肠杆菌的形象特征。经生化试验鉴定为大肠杆菌（结果见表4），血清学鉴定O抗原型为O1。

表4分离菌生化鉴定结果

VP	MR	靛基质	H2S	葡萄糖	乳糖	麦芽糖	蔗糖	甘露醇	枸橼酸盐
-	+	+	-	⊕	⊕	⊕	⊕	⊕	-

药物治疗结果 各药物治疗组饮水给药后的1周内，各组的治愈率、保护率、死亡率及相对增重率结果见表5。

表5连葛口服液对人工感染鸡大肠杆菌病的疗效

组别	死亡数	死亡率%	治愈率%	保护率%	相对增重率%
1组（连葛高剂量组）	8	16Bc	76Aa	84Aa	85.85Bb
2组（连葛中剂量组）	9	18Bc	70ABa	82Aa	84.84Bb
3组（连葛低剂量组）	15	30Bb	56Bb	70Ab	74.19Bc
4组（氟苯尼考组）	10	20Bbc	72ABa	80Aab	82.35Bb
5组（阳性对照组）	26	52Aa	8*Cc	48*Bc	10.54Cd
6组（阴性对照组）	0	--	--	--	100.0Aa

*：自愈或症状自行缓解 注：大写字母不同代表组间差异极显著（p<0.01）；小写字母不同代表组间差异显著（p<0.05） 统计学分析结果表明：四个药物治疗组（连葛口服液高、中、低剂量组，氟苯尼考组）的死亡率、治愈率、保护率、相对增重率与阳性对照组相比较差异极显著（P<0.01），因此，临床试验结果表明，连葛口服液高中低3个剂量及氟苯尼考均对人工感染鸡大肠杆菌病有一定的防治效果。 连葛口服液低剂量组在治愈率、相对增重率方面与氟苯尼考组相比差异显著（p<0.05），说明低剂量的连葛口服液对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果不佳，不及氟苯尼考；而连葛口服液高、中剂量组与氟苯尼考组相比，死亡率、治愈率、保护率、相对增重率方面均为差异不显著(P>0.05)，说明高、中剂量的连葛口服液对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果与氟苯尼考相当；连葛口服液高、中剂量两组之间各项指标差异不显著(P>0.05)，表明对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果无显著差异。 综合各项指标，连葛口服液高、中剂量组对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果良好，与氟苯尼考疗效相当。高、中剂量两组在各项统计指标中无显著性差异，所以，以中剂量为推荐剂量。 3、讨论 鸡大肠杆菌病的治疗药物
鸡大肠杆菌病是鸡的一种常见传染病，目前该病的防治多以使用抗菌的化学药物为主，但随着时间的延长，大肠杆菌对抗菌的化学药物的耐药性问题越来越突出。另外，畜产品无公害化生产的要求，使抗生素的选择范围越来越小。而中药治疗效果受菌株耐药性的影响较小，且毒性小、副作用小、几乎无残留，所以研究应用中药防治鸡大肠杆菌病有重要的现实意义。 鸡大肠杆菌病辩证施治
鸡大肠杆菌病按中兽医理论类属于湿热壅积肠道的里热证、泄泻证，多由外感暑湿、疫毒之邪，或饮食不洁，湿热郁结肠内，胃肠受损，运化失常，湿热内生，致使气血阻滞，湿郁热蒸，肠胃气化被阻，气血与暑湿热毒博结，而成湿热泄泻，治宜健脾补中，清热解毒，燥湿止痢。连葛口服液正是根据这一观点进行组方，所组的复方制剂具有较强的清热解毒和杀菌作用，还能综合调理机体的各种生物机能，增强机体免疫力。 连葛口服液对鸡大肠杆菌病的疗效作用 “连葛口服液”是由经典中药方剂“葛根芩连汤”改良而成的具有清热解毒、燥湿止痢、活血化瘀、抗菌消炎等作用的新型中草药制剂。是由黄连、黄芩、葛根、甘草、大黄5味药组成，方中以黄连为君药，取其大苦能燥湿、大寒可泻热之功，发挥清热解毒、燥湿止痢的作用；以黄芩、葛根同为臣药，黄芩具有清热燥湿，泻火解毒之功，葛根可退热生津、升阳止泻，二者共助黄连清热解毒、燥湿止泻之功；以炙甘草为佐药，补脾益气，使君臣药物攻而不致伤正、补亦不致助邪；以大黄为使药，既可增强君臣药物燥湿解毒之功，又能活血化瘀、通肠泻热、推陈出新、快速排出毒素，同时引诸药入脾、胃、大肠经。诸药同用，共奏清热燥湿、通肠排毒之功。故而对由大肠杆菌引起的湿热壅积肠道的“湿热泻痢证候”模型具有较好的治疗作用。 连葛口服液采用饮水给药，这种给药方式比混料方便，同时鸡只发病时往往引起采食量下降，但饮水量下降不明显，因而饮水给药能保证鸡体内药物的有效浓度，从而达到较好的疗效。
4、结论 试验结果表明，连葛口服液对由鸡大肠杆菌引起的“里热证、泻痢证”模型具有良好的疗效。其中高、中剂量治疗组的保护率达84%、82%，其效果与添加20mg/kg的氟苯尼考可溶性粉效果相当。 根据本试验结果，考虑经济成本，以中剂量为推荐剂量。其具体用法用量为：鸡，混饮，1.0mL/kg体重，连续用药5天，用于治疗鸡大肠杆菌病。