1.4.2 抑制有害物质的产生 肠道内的腐败菌。大肠杆菌等增多,会产生如氨、生物胺、蚓哚和酚等一些有害物质,这些物质具有潜在抑制生长和致癌作用,但添加寡糖或益生素后,生成这些物质的酶活性会受到抑制,因而控制有害产物的生成。保加利亚乳酸杆菌的代谢产物能中和大肠杆菌外毒素,许多好氧菌产生的SOD可帮助动物消除氧自由基。饲喂啤酒酵母后,肠道内有益菌群大量增殖,它们在抑制潜在病原菌的同时,也能阻止肠内腔和氨的产生、促进肠蠕动、维持完整的肠粘膜结构。双歧杆菌可以通过其代谢产物抑制致病菌和肠内固有腐败菌,减少肠道内毒素反腐败产物的含量,减轻肝脏的解毒负担,增强肝脏的营养代谢功能。 1.4.3 合成与分泌更多营养物质及消化酶 研究表明,动物饲喂寡糖或益生素可使肠道内有益菌如乳酸菌、双歧杆菌等增多,它们可在肠内合成B族和K族维生素及蛋白质,增加血液中钙、镁的数量,改善动物对矿物质的吸收,甚至产生某些未知生长因子,加强动物体营养代谢,促进动物生长,产生蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶等酶类,提高3大有机物质的消化率,同时产生如嗜酸菌素、乳糖菌素等抗菌物质,抑制病原菌在肠道内繁殖,合成氨基酸、维生素等营养物质。许多微生物还具有很强的利用纤维素、半纤维素、果胶、几了质和植酸磷等动物本身不能直接利用的物质的能力,并释放出细胞内原生质物质供动物利用,从而促进动物生长发育和增重。Hotten(1988)报道,枯草芽孢杆菌和地农芽杆菌具有较强的蛋白孢酶、淀粉酶和脂肪酶活性,同时还具有降解植物饲料中非淀粉多糖酶如果胶酶、葡聚糖酶、纤维素酶;酵母菌和霉菌均能产生蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶等多种酶类,可提高蛋白质和能量利用率。益生菌的蛋白酶和肽酶组成的蛋白酶系统能分解蛋白质和多肽,一方面使饲料养分更易利用,另一方面,益生菌自身蛋白质分解后也可以为畜禽提供更多的营养素。 1.4.4 产生过氧化氢 嗜酸乳杆菌。乳酸乳杆菌等在动物体内可产生过氧化氢( B.Wren等,1982),激活动物大肠内的过氧化物酶-硫氰酸盐反应系统,使乳酸过氧化物酶与过氧化氢结合,然后将硫氰酸盐氧化成氧化性中间产物,抑制葡萄球菌等致病菌的生长繁殖(闵晓梅等,2001)。顾宏伟(1994)指出,蜡样芽抱杆菌孢子加到鸡饲料中,肉鸡后期(28-49日龄)血液中超氧化物歧化酶活性明显高于对照组,盲肠沙门氏菌阳性率显著降低。 1.4.5 产生细菌素 细菌素是一类选择性作用于细菌靶细胞的抗菌物质,几乎每一乳酸菌株都能产生细菌素。乳酸乳球菌产生的Nisin细菌素可抑制链球菌、葡萄球菌及校状芽孢杆菌生长(杨洁彬等, 1996)。嗜酸乳杆菌产生的细菌素能抑制大肠杆菌DNA合成。自枯草芽孢杆菌中提取的枯草菌素(subticin),能抑制真菌。双歧杆菌还能产生Bifidin菌素,其主要由苯甲基丙氨酸和谷氨酸组成,对肠道腐生菌起抑制作用。此外,还有牛肝菌素、嗜酸乳菌素、嗜酸菌素和无蛋白菌质(Reuterin),能有效地抑制广谱性革兰氏阳性、革兰氏阴性细菌、酵母和真菌产生的毒性氧化代谢物则emcora R,(1997)。 1.4.6 产生诱导酶 双歧杆菌和某些乳杆菌能产生胞外糖苷酶,降解肠粘膜上皮细胞上致病菌和细菌毒素的潜在受体??复杂多糖,通过酶作用,阻止毒素对上皮细胞的粘附和侵入。添加双歧杆菌,小鼠腹腔巨噬细胞内重要的溶酶体酶??酸性磷酸酶的含量大大提高(郑仁恕等,1994)。 1.5 调节免疫系统 益生菌活菌的粘附特性乃诱导免疫的一个重要因素。病原菌与上皮细胞结合,诱导组织、巨噬细胞程序性死亡,引起炎症反应(Lu L et al,2001)。益生菌(Ewing et al,1994)可保护肠壁,与病原菌竞争附着并进入肠上皮细胞,增大细胞间隙,刺激巨噬细胞产生 sIgA、 sIgM,有效地抑制感染(Perdigon et al,1995)。乳酸菌的两种不同的粘附机理分别为,一种是需要Ca2+的非特异系统,Ca2+信号活化途径可促进乳酸菌与肠细胞的特异受体结合,所有的乳酸杆菌可借助此系统进行粘附;另一种是Ca2+独立系统,该系统中有两种乳酸成分参与乳酸菌的粘附,一种是抗蛋白酶(与菌体表面吸附有关),另一种是热稳定县对蛋白酶敏感的胞外蛋白,部分乳酸杆菌借助此系统进行粘附(Chauviere G et al,1992)。也有人认为乳酸菌的细胞脂磷酸壁质是重要的粘附因子,尤其是对啮齿类组织的粘附,其粘附于粘膜上的功能与粘膜多糖有关(Granato G et al,1999)。双歧杆菌的粘附则是借助细菌表面或双歧杆菌培养物上清液中类蛋白促粘附因子,通过细丝状的成分特异性粘附于肠道粘膜表面上,诱导抗体产生(Ryhanen EL,1996)。用灭活的酵母喂生长猪3周,可提高十二指肠近端甘露糖从粘膜到浆膜的流速,提高回肠林状细胞数量,增加结肠粘膜厚度(Breres G et al,2001)。肠道上皮细胞含有甘露寡糖,肠道病原体凝集素易与甘露寡糖相结合,而酵母细胞壁的甘露寡糖也能吸附有毒物质和病原菌,使细菌不能与肠壁上含甘露寡糖的细胞结合,从而保护动物肠道(Kent L,2000),提高动物抗病力。细菌脂多糖(LP)和细菌肽聚糖(PG)可通过信号传导通路刺激巨噬细胞、内皮细胞、嗜中性粒细胞产生介质,如肿瘤坏死因于、IL-1、IL-6、IL-8、IL-12等,对介导非特异性免疫起重要作用(Kopp et al,1999)。LPS也可单独或联合IFN-r诱导巨噬细胞的NO合酶的mRNA表达,促进能活化巨噬细胞杀灭肿瘤细胞及病原微生物的 NO的合成(Sidney M et al,1994)。Liene (1995)则发现LPS可通过活化巨噬细胞的蛋白激酶C,促进NO合酶mRNA的表达与翻译。Kitazawa H等(2001)从乳酸杆菌提取的 DNA能够诱导脾淋巴细胞扩增,其DNA中的2个核着酸序列(SOL-LG7和SOL-LG10)与促有丝分裂剂的序列具有高度同源性,可诱导B淋巴细胞分裂。 1.6 减少胆固醇的机制 胆汁酸、去氧胆汁酸经常结合甘氨酸或牛横形成甘氨胆酸或牛磺胆酸,被乳酸杆菌中的细菌酶。胆盐水解酶所解离(Cilliland SE,1990)。解离的胆酸有杀菌作用,粘附到细菌纤丝上形成沉淀而排出体外,导致肠肝循环减少,胆固醇转化率升高,产生更多胆酸,从而降低胆固醇(Gilliland,1990)。Fletcher(1995)发现喂较高胆盐水解酶活性的乳酸菌,兔和仓鼠的血清胆固醇水平下降,粪便胆酸升高。Fukushima等(1996)研究了单一菌种、混合菌种对血胆固醇浓度的影响,结果表明混合菌种仓鼠血胆固醇浓度比单一菌种下降更明显,并观察到粪中胆固醇浓度增加,肝脂肪酸合成减少,肝脏内源性胆固醇生物合成的限速酶--β-羟-β-甲基戊二酸辅酶A还原酶活性显著降低(Mtal,1995)。 益生细菌也可直接同化吸收胆固醇,在胆汁存在条件下,胆固醇降解显著。此外,益生细菌抑制肠内分子团的形成,促进胆固醇与胆酸及短链脂肪酸的发酵作用,对胆固醇代谢也起重要作用(Mohan,1996)。Bouhnik(1996)发现胆固醇降解与细菌浓度高度相关。博晓丽等(1992)研究表明粪肠球菌、屎链球菌及其提取物也具有降低血清胆固醇和甘油三酯的作用。 1.7 延缓不耐乳糖症 一般说来,人与高等动物因肠道中缺乏β-半乳糖苷酶而易出现乳糖不耐受,不能完全吸收乳糖,而乳糖会改变结肠胜渗透平衡而引起水样腹泻,大量乳糖可导致肠内菌群失调。当然小肠细胞中也含有少量内源乳糖酶,加之肠内菌群亦能消化少许乳糖,因此宿主能耐受少量乳糖(S.salminen AC et al,1998)。然而一旦肠道菌群失调,粘膜杯状细胞形态数量均发生变化,则动物乳糖耐受程度降低,若加入以乳酸菌为主的益生素可以改善肠道生理状态,增强乳糖耐受。此外,一些乳酸杆菌中尚含有乳糖磷酸转化酶系统(PTS)及乳糖分解途径,将乳糖转化为乳酸(Prouault S,2001)或通过水解将饲料中乳糖水解成葡萄糖和半乳糖,对动物不造成影响(Drouault S et al, 2001)。Beyer EC等(1982)发现在成年鸡的小肠中有2种结合乳糖的凝集素,鸡乳糖凝集素-1、乳糖凝集素-2,是由小肠粘膜杯状细胞分泌的,且伴随着粘蛋白的分泌而分泌,所以鸡对乳糖的耐受比其它动物强。 1.8 净化环境的机制 枯草芽抱杆菌可在大肠中产生氨基氧化酶、氨基转移酶及分解硫化物的酶,将臭源吲哚化合物完全氧化,将硫化物氧化成无臭无毒物质,从而降低血液及粪便中有害气体浓度,减少其向外界排放的量,改善饲养环境(赵芙蓉等,1998)。嗜胺菌能消化肠道游离的氨(胺)及吲哚等有害物质,抑制大肠杆菌的活动;而排出的粪中所含有的活菌体,可消化剩余的氨(孙黎等, 2001)。苏云金将杆菌添加到禽舍内,可抑制蛆的孵化,减少苍蝇;小鸡口服后,产生的粪便对蛆有杀毒作用(Lahi IM et al,2001)。用放线菌微生物作除粪臭剂,除臭率达66%,而禽类经处理后成分基本不受影响(林敏等,1995)。G Pleluigi等(2001)认为,乳酸杆菌中含有精AA脱亚氨阳性酶,可明显降低多胺水平。 1.9 提高液体饲料质量的机制 在生物技术的角度上讲,乳酸菌不仅可以改善肠道菌群,而且有益于液体饲料中的菌群;从动物营养而言,则可减少微生物对饲料的降解。饲料卫生差的不良影响多源于微生物的代谢产物。由于微生物利用了饲料中的养分,从而降低了饲料营养价值。许多大型矿物质饲料和预混料生产商,旨以解决许多地方因饲养卫生差所引发的问题,提出了在生态系统(液体饲料冲使用益生素建立良性生态平衡的净化措施。 作为益生素,乳酸菌和酿酒酵母的试验结果提供了正面依据,乳酸菌的快速繁殖产生了大量的乳酸,降低了液体饲料的pH值,而饲料的酸化对饲喂系统和动物肠道中微生物的分配有利,因为病原微生物生长适宜pH一般都在7左右。此外,乳酸菌与有害微生物的竞争抑制其繁殖。 2 在动物生产中的应用 2.1 促进动物生长发育,提高饲料的利用率,改善动物产品质量 益生素通过产生大量消化酶类,如丝状真菌中的木酶、曲酶能产生蛋白酶、淀粉酶、半纤维素酶等各种消化酶(Jin LZ et al, 2000);或经肠内发酵直接产生丙氨酸、缬氨酸、天冬氨酸和苏氨酸等,还可产生维生素等(刘林如等,1991),提供动物机体所需营养物质;在动物胃肠道形成微酸性环境,激活内源酶活性,维持肠道内pH值,有利于维生素D、Ca2+、Fe2+等的消化吸收。