1、细胞培养分离病毒。取1月龄内病雏的肾脏或直肠,按1∶5加入细胞培养液匀浆,加入适量抗生素,反复冻融2~3次,以3000 r/min离心30min,上清液经50nm滤膜过滤后,接种于19日龄鸡胚的单层肾细胞上,经37℃培养观察。感染的CKC培养物在接种后72h内出现柳叶状或圆形CPE,但不产生包涵体和血凝素。
2、鸡胚接种分离病毒。将上述处理好的样品接种6日龄鸡胚,5d后ANV将致死鸡胚,然后再在鸡胚中传几代,使ANV能在接种2d后致死鸡胚,感染鸡胚出现出血和水肿。 细胞培养或鸡胚中的病毒抗原,可用特异性抗ANV血清,以IF、SN和ELISA来检测ANV特异性抗体。
3、中和试验。主要用于检测血清抗体。取待检血清与适量ANV混合,经37℃温箱孵育1h后,卵黄囊内接种6日龄以内鸡胚,11d后若发现鸡胚出现生长受阻,爪发生卷曲等特征性变化,则说明该血清不含ANV的中和抗体,可与禽传染性脑脊髓炎病毒作鉴别诊断。 传染性支气管炎病毒(IBV)的某些肾病变毒株也可引起鸡的间质性肾炎,根据组织学变化很难将两种病区分开,但IB气管内有变化,并且肾脏的感染通常在有呼吸道症状之前,根据这些可区别于ANV的感染。同时还应注意在同一鸡群中两种疾病同时出现的可能性。