现场观察笼养发病珍珠鸡的临床症状,剖检新鲜死亡的珍珠鸡20只,并记录病理变化。进行肝脏细菌分离,用无菌棉拭子自肝脏烧烙面插入取得样品分别划线于普通琼脂、XLD琼脂、血清琼脂、血液琼脂,以及营养肉汤中,37℃培养24h,并取少量肝组织用于病毒分离培养。
    一、材料与方法
    1、病毒增殖培养与检验
    珍珠鸡肝病料剪碎、研磨,加4倍体积的灭菌生理盐水制成肝悬液,反复冻融3次,3 000rpm离心15min,上清液通过细菌滤器后接种孵化10日龄珍珠鸡胚5只,收获接种后24～72h死亡或活胚的胚液,进行微量血凝试验(HA),以检验是否含血凝性病毒。
    2、动物接种试验及HI检测
    肝悬液经滴管直接插入食道深处的灌服途径接种3周龄的珍珠鸡4只,每只5mL,并以皮下注射0.2mL/只的途径接种小白鼠8只。细菌纯培养物悬液以皮下注射0.2mL/只的途径接种小白鼠4只。接种动物观察2周,对死亡动物进行肝脏细菌分离培养,肝脏触片检查细菌。对接种2周后仍存活的珍珠鸡抽血检测禽流感H5、H9和新城疫的HI抗体水平。
3、药敏试验
选择常用药物的药敏试纸对分离菌株进行药物敏感检测,包括:头孢拉定、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星,利福平、庆大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、新霉素、安卞青霉素、壮观霉素、四环素、麦迪霉素、强力霉素、林可霉素、阿莫西林、链霉素、红霉素、青霉素、先锋必、先锋V、痢特灵。采用药敏试验圆纸扩散法,在血清琼脂平皿涂布,贴放药敏试纸,37℃培养24h,测量抑菌圈直径(mm),对照抑菌圈直径判断标准,参照抗菌药物敏感性试验执行标准,分敏感、中等敏感和耐药3个等级判断药敏试验结果。
    二、分析
    1、临床症状及剖检病理变化
    剖检见大多数死亡珍珠鸡呈现卵黄性腹膜炎和输卵管炎,成熟卵泡松软、卵泡表面充血、出血、变形、卵黄色泽变淡或呈水囊样变性,腹腔中积聚多量水样或干酷样卵黄性物质。输卵管和子宫内有白色透明的水样积液;部分死珍珠鸡呈现心包液增多,心肌和心冠脂肪出血,肺脏充血出血呈紫黑色,十二指肠黏膜充血、出血,部分肠腔内有多量血样黏液积聚;肝脏稍肿大,质脆,缺乏弹性。有个别的腺胃黏膜脱落,肌胃角质膜下见出血斑点;盲肠肿胀,肠腔充满气体;偶见个别胰腺表面有点状出血或坏死。
    2、病原菌分离培养特性
    从死亡珍珠鸡肝脏分离到一株细菌,初次分离菌株经37℃培养24h,在普通琼脂斜面上生长呈现较薄菌苔;在普通肉汤中呈现均匀混浊生长;在血清和血液培养基上生长呈灰白色、圆形、光滑、湿润、隆起、边缘整齐的露滴状小菌落,直径约1mm,血液培养基上菌落周围不溶血www.nczfj.com/。初次分离在麦糠凯和XLD培养基上不生长,经血清琼脂3代次纯繁培养后,以及从接种小白鼠肝脏回归分离的血液琼脂培养物,均能在麦糠凯和XLD上生长呈灰白色菌落。
    3、病毒检测结果
    通过无菌滤器的滤液接种5枚孵化10日龄珍珠鸡胚,72h后仍存活,5个珍珠鸡胚的胚液HA检测结果均呈阴性,表明肝悬液滤液中无血凝性病毒存在。
    4、药敏试验结果
    对分离株敏感的药物有:头孢拉定、氧氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、壮观霉素、链霉素和先锋V;中等敏感的药物有:利福平、庆大霉素、丁胺卡那、氟哌酸、新霉素、痢特灵;耐药的药物有:安卞青霉素、四环素、麦迪霉素、强力霉素、林可霉素、阿莫西林、红霉素、青霉素和先锋必。
    三、总结
    禽巴氏杆菌的宿主很多,几乎所有的鸟类都易感。性成熟的鸡比青年鸡易感。该病多发生于产蛋禽群,并常引起产蛋下降和局部持续性感染。本诊断过程发病珍珠鸡病料肝患液直接食道灌服接种3周龄珍珠鸡不发病,可能是因为幼龄珍珠鸡易感性低,以及禽巴氏杆菌的感染门户是口腔和喉头黏膜而不是食道、嗉囊和脾胃。
    经药物治疗后,发病的产蛋珍珠鸡群很快停止死亡,恢复正常采食量,但产蛋率难以恢复发病前水平,只能淘汰部分母鸡,因此,对产蛋珍珠鸡群,预防该病的发生显得更加重要。选择血清型对应的商品疫苗或自家组织疫苗,秋冬季开产的种珍珠鸡群要进行开产前免疫接种,对产蛋珍珠鸡群每月定期投放预防性药物或在应激时投放3d预防药物,能有效预防该病以及其他细菌病的发生。